以下通用步骤可以在保持细胞完整性的同时从培养器皿中分离多种细胞系。但这一步骤不能广泛适用于所有细胞系。应通过实验来确定不同体系所需的佳条件和浓度。
 

　　?在传代培养时监测细胞存活率。
 

　　?细胞存活率应大于90%。
 

　　?对于无血清培养基，建议降低胰酶用量。
 

　　1.去除器皿中原有细胞培养基。
 

　　2.用不含钙镁的平衡盐溶液或EDTA清洗细胞。将清洗溶液加到培养瓶中与细胞相对的一侧。摇动培养瓶1-2分钟以冲洗细胞层，然后倒掉清洗溶液。
 

　　3.在培养瓶中与细胞相对的一侧以2-3ml/25cm2的比例加入选定的解离溶液(见下表)。确保解离溶液能够覆盖整个细胞层。在37℃下孵育培养瓶。并轻轻摇动。通常细胞在5-15分钟内解离。不同细胞系的解离时间有所不同。仔细观测解离过程，以免损伤细胞。对于难从基质上解离下来的细胞系，可以轻敲培养瓶以加快解离过程。
 

　　4.当细胞解离时，竖直放置培养瓶使细胞流向培养瓶底部。向培养瓶中加入培养基。反复吹吸单层表面以分散细胞。计算细胞个数，然后传代培养细胞。
 

　　注意：如果使用无血清培养基，应加入大豆胰酶抑制剂。对于0.25mg/ml的胰酶抑制剂，一般按1：1(体积比)的比例加入即可抑制胰酶。细胞