产品描述

Mich TLX DNA-seg kit (illumina Compatible) 是为 illumina 平台设计的 DNA 文库准备试剂盒,适用于起始量 1 ng-200 ng 的 DNA 样本，试剂盒经过精心设计和优化，能够快速构建文库(2.5-3.5小时)，有高效的文库转化率与扩增效率，已经经过多样本验证可获得优异的文库与测序数据，可用于石蜡包埋组织 DNA 样本建库。试剂盒包含了 DNA 片段化和末端修复加 A尾的预混液、连接预混液、高保真扩增预混液、短接头和含有 INDEX 的 PCR 引物(可以根据客户要求进行选配)。

(注意: 本试剂盒不可直接用不带 INDEX 的引物进行 PCR 反应)。

产品信息

产品组分

使用流程

注意事项

一、关于操作

1. 请穿实验服并戴一次性手套进行实验。

2. 使用前请将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3. 混匀时请轻轻吹打或轻轻振荡，剧烈振荡可能会造成文库产出下降。

4. 为避免样品交叉污染，推荐使用带滤芯的一次性枪头。

5. 推荐在带热盖的 PCR 仪中进行各步骤反应，使用前应预热 PCR 仪至反应温度附近请在洁净的实验环境下实验，避免污染。

二、TLX Adapter for ILM说明

1. TLX Adapter for ILM 采用短接头模式。

2. 接头浓度: 15 uM；直接用于相应建库试剂盒连接体系里即可。

3. -20°C保存，使用前提前融化，尽量低温融化，避免在超过 30°的环境中融化。

4. 建库推荐使用量: 常规 DNA投入量 100-200 ng,2uL/rxns; 其他 DNA 投入量需要适当调整接头使用量。

三、关于磁珠纯化与分选

1. DNA 片段选择步骤可在接头连接后或文库扩增后进行。

2. 当Input DNA质量> 50 ng，建议在接头连接后分选；如Input DNA 质量<50 ng，可在文库扩增后进行分选。

3. TLX Ligase Buffer 包含高浓度的 PEG，对双轮磁珠分选产生显著影响。因此，当在接头连接后进行片段选择，须先进行纯化步骤，再进行双轮分选步骤，如在文库扩增后进行片段选择，可直接进行双轮磁珠分选步骤。

4. 磁珠使用前应先平衡至室温，并混匀再使用，否则会导致得率下降。

5. 80%乙醇应现用现配，否则将影响回收效率。

6. 6进行片段选择时，初始样品体积应尽量> 100 uL，初始样本体积越大，片段选择效果越好。

四、关于文库扩增

五、关于文库质检

1. 通常情况下，构建好的文库可通过长度分布检测和浓度检测来进行质量评价。

2. 文库浓度检测可使用：基于双链 DNA荧光染料的方法，如Qubit或 gPCR 绝对定量的方法。

3. 文库长度分布检测，可通过 Agilent Bioanalvzer 2100 等基于毛细管电泳或微控流原理的设备进行检测。